İstenen sayfanın yerel versiyonuna yönlendirildiniz

Gizlilik Politikası

Metrohm AG ve bağlı alt kuruluşları ile tek-yetkili distribütörlerinin Gizlilik Politikası ile uyumlu olacak şekilde verilerimi kaydedip işlemesine, taleplerim ve reklam amaçlı olarak benimle e-posta, telefon ya da mektup aracılığıyla iletişime geçmesine izin veriyorum. Bu onayı istediğim zaman  info@metrohm.com.tr  adresine e-posta yollayarak geri çekebileceğimi biliyorum.

This field is required.

Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi (USP), 2010 yılında yaklaşık 4300 Monografı ve 220 Genel Bölümü modern teknolojik yöntemlerle güncellemeye başlamıştır [1]. Bu süre zarfında, iyon kromatografi (IC) de olgunlaştıkça daha popüler bir analitik teknik haline gelmiştir. Düzenleyici kurumlar artık, IC'yi farmasötik ve biyofarmasötik örneklerin analizi için kabul edilebilir bir teknoloji olarak görmektedir. 

İlaç sektöründe IC analizlerinin kapsamı oldukça geniştir. IC eser miktardaki safsızlıkları, eksipiyanları, aktif farmasötik bileşenleri (API'ler) ve metabolitleri inceleyebilir, ayrıca farmasötik çözeltiler ve vücut sıvılarındaki iyonik bileşenleri tespit edebilir [2–10]. Bu kalite kontrol parametreleri, ham maddelerde, üretim süreci sırasında ve nihai ürünlerde ölçülebilmektedir. IC aynı zamanda, proses suyu ve atık suyun kalite kontrolü için de uygun bir yöntemdir ve bu üretim sürecini güvence altına alırken, tahliye edilen atık suyun yönetmeliklere uygun olmasını sağlamaktadır [2,11–17].

Bu blog makalesi, USP metotlarının modernizasyonu sırasında IC'nin kullanılmasına odaklanmaktadır. Ayırma kolonlarının eşdeğerliği ve USP gerekliliklerine uygun analitik yöntemler kullanılarak, laboratuvarda nasıl daha esnek olunabileceği aktarılmaktadır.

İhtiyacınız olan konu içeriğine doğrudan gitmek için aşağıda yer alan bağlantıları kullanın:

USP Genel Bölümleri ve Monograflar

USP güvenli ilaçlar, farmasötik maddeler, diyet takviyeleri ve gıda ürünleri için kalite standartları sağlamaktadır. Temel varsayımlar ve tanımlar «Genel Bildirimler ve Gereklilikler» bölümlerinde özetlenmektedir. «Monograflar» ve «Genel Bölümler», test prosedürlerini ve kabul kriterlerini veya ürünlerin kimliğini, kalitesini ve saflığını sağlamaya yönelik genel kılavuzu açıklamaktadır.

Kromatografik validasyon, yeterlilik ve sistem uygunluğuna ilişkin USP kılavuzu

Genel Bölüm <621> [18] (<1065> [19] ve <1225> [20] ile birlikte), IC de dahil olmak üzere kromatografik yöntemlerin validasyonuna ve kalifikasyonuna odaklanmaktadır. Aynı zamanda, sistem uygunluk testi için gereklilikleri ve genel çerçeveyi de belirlemektedir.

Sistem uygunluk testleri analitik prosedürün ayrılmaz bir parçasıdır. Bu testler, kromatografik sistemin yeterli performansını garanti etmektedir. Kromatografik prosedür boyunca sistem uygunluk kriterlerine uyum zorunludur. Numune analizi, ancak sistemin uygunluğunun gösterilmesi halinde kabul edilmektedir.

Yüksek kaliteli farmasötik analizler için spesifikasyonlar ve gereklilikler 

Monograflarda ve Genel Bölümlerde açıklanan analitlerin belirlenmesine yönelik bir USP metodunun genel validasyon ve kalifikasyon süreci, çok karmaşıktır ve daha önce de belirtildiği gibi katı talimatların temelini oluşturmaktadır.

Bu USP yöntemlerinde belirlenmiş genel kromatografik prosedürler, kromatografik sistem ve koşullar hakkında çok sayıda ayrıntı içermektedir. Bu koşullar için sistem uygunluk testleri, kromatografik yöntemin ilgili analitleri ölçmek için sağlam ve geçerli olduğunu göstermektedir. Bu tür testler, kabul kriterlerine uymasının yanı sıra aşağıda açıklandığı üzere, metot performans kriterlerinin [18,21] karşılaması gereken tekrarlanan numune ve standart ölçümleri içermektedir: 

  • teorik plaka sayısı (N, kolon verimliliğinin ölçüsüdür)
  • kuyruklanma faktörü (simetri faktörü AS olarak da adlandırılır, pik asimetrisinin bir ölçüsüdür) 
  • çözünürlük (RS, ayırma kalitesini tanımlamaktadır) 
  • bağıl standart sapma - en az üç, ancak en fazla altı enjeksiyon veya referans çözelti uygulaması için ardışık ölçüm serilerinden hesaplanan sistem tekrarlanabilirliğinin bir ölçüsüdür

Modern kromatografik yazılım programları (ör. MagIC Net), bu parametrelerin genel hesaplama prosedürünü kolaylaştırmaktadır. Ancak, validasyon prosedürünün tamamı katı, zahmetli ve çok karmaşıktır.

Gizlilik Politikası

Metrohm AG ve bağlı alt kuruluşları ile tek-yetkili distribütörlerinin Gizlilik Politikası ile uyumlu olacak şekilde verilerimi kaydedip işlemesine, taleplerim ve reklam amaçlı olarak benimle e-posta, telefon ya da mektup aracılığıyla iletişime geçmesine izin veriyorum. Bu onayı istediğim zaman  info@metrohm.com.tr  adresine e-posta yollayarak geri çekebileceğimi biliyorum.

This field is required.

Analitik kolon: metodolojinin temel parçası

Metodolojik parametreler göz önüne alındığında, kolonun metodun önemli bir parçası olduğu açıktır. Bu, boyutlar ve kolon dolgusu (veya USP veritabanına göre L-grubu sınıflandırması) ile belirtilmiştir.

Tablo 1'de IC analiziyle ilgili bazı L-grupları, açıklamaları ve eşdeğer Metrohm kolon örnekleriyle birlikte listelenmektedir. Bunlar, USP kolon veritabanında [22] bulunmakta ve ayrıca USP dokümanlarının «Reaktifler» bölümünde [23] de belirtilmektedir.

Tablo 1. L-grupları dolgulu USP kolonları, tanımlar, Metrohm uyumlu ayırma kolonları ve bunların geçerli olduğu USP Monografları.

Dolgu Tanım Uyumlu Metrohm kolonu USP Monograf(lar)ı
L46 Polistiren/divinilbenzen substratı, kuaterner amin işlevli lateks tanecikleri ile birleştirilmiştir (çap 9–11 µm). Metrosep A Supp 1 - 250/4.6 Vorikonazol, Sodyum Florür ve Asitle seyreltilmiş Fosfat Topikal Çözeltisi, Sodyum Florür Oral Çözeltisi, <345> Sitrik Asit/Sitrat & Fosfat Testi
L76 Silika bazlı zayıf katyon değiştirici malzemenin çapı 5 µm'dir. Substrat, karboksilik asit işlevsellikleri sağlamak için yüzey polimerize edilmiş polibütadien-maleik asittir. Kapasite 29 µEq/kolondan az olmamalıdır.

Metrosep C 4 - 250/4.0

Metrosep C 6 - 150/4.0

 Kalsiyum Asetat Kapsülleri, Potasyum Sitrat & Sitrik Asit Oral Çözeltisi, Oral Çözelti için Potasyum Bikarbonat Efervesan Tabletler, Oral Çözelti için Potasyum ve Sodyum Bikarbonatlar ve Sitrik Asit Efervesan Tabletler, Oral Çözelti için Potasyum Bikarbonat ve Potasyum Klorür Efervesan Tabletler (Potasyum)
L91 Dörtlü amin ile birleştirilmiş monodispers gözenekli polistiren/divinil benzen taneciklerinden (çap 3–10 µm) oluşan güçlü anyon değişim reçinesi.

Metrosep A Supp 10 - 250/4.0

Metrosep A Supp 16 - 100/4.0

Metrosep A Supp 17 - 150/4.0

Metrosep A Supp 19 - 150/4.0

 Çinko Oksit, Nötr Çinko Oksit, Çinko Oksit Tozu, Çinko Sülfat Göz Çözeltisi, <591> Çinko Tayini, Sodyum Florür, Sodyum Florür Jel, Sodyum Florür Oral Çözelti, Oral Çözelti için Potasyum Bikarbonat ve Potasyum Klorür Efervesan Tabletler, Sodyum Florür Tabletler, Kalay Florür, Sodyum Monoflorofosfat, Kalay Florür Jel, Potasyum Fosfat Katkılı Enjeksiyon, Çözelti için Sodyum Klorür Tabletleri, Sodyum Fosfat Katkılı Enjeksiyon
L97 2000 Å gözenek boyutuna sahip, 5,5 µm gözenekli parçacıklardan oluşan yüksek düzeyde çapraz bağlı bir çekirdekten oluşan ve %55 divinilbenzen ile çapraz bağlanmış etilvinilbenzenden oluşan zayıf katyon değişim reçinesi. Substrat, karboksilik asit işlevselleştirilmiş gruplarla yüzeye aşılanmıştır. Kapasite 2400 µEq/kolon (4 mm x 25 cm)'dan az olmamalıdır. Metrosep C Supp 2 - 250/4.0 Sodyum Bikarbonat Katkılı Enjeksiyon, Sodyum Fosfat Katkılı Enjeksiyon
L105 Alkil kuaterner amonyum iyon bölgeleri sağlamak üzere çok düşük çapraz bağlı lateks (%0,2) ile işlevselleştirilmiş yüksek düzeyde çapraz bağlı 9 µm süper makro gözenekli (2000 Å) parçacıklardan oluşan güçlü bir anyon değişim reçinesi. Metrosep A Supp 4 - 250/4.0 Sodyum Nitrit

Kolonlar için USP metot kabul kriterleri

Öncelikle kolonun belirli bir L-kategorisine atanması gerekir. Her L-grubuna veya kategorisine ait malzemeler, belirli özelliklere ve kolon fizyokimyasına (örnekler için Tablo 1'e bakınız) sahiptir. Bunların, söz konusu ayırma kolonunun özellikleri ve kolon kimyasıyla eşleşmesi gerekir. L-grubu kategorileri, tek bir sağlayıcıdan veya farklı üreticilerden farklı kolonlar içerebilmektedir.

USP, bir L-grubuna ayrı bir kolon atarsa, Monografta açıklanan koşullar daha önce açıklandığı gibi nitelendirilebilir (örneğin, USP <591>'a [24] göre çinko oksit tespiti; AN-U-076). L-grubu, belirli bir kolon için değil, her IC yöntemi için belirtilir. Bu, yöntem yeterliliği için aynı L-grubunun bir kolonunu seçerken tercihlerine bağlı olarak kullanıcıya bir miktar esneklik sağlar (Tablo 1).

Kolon Eşdeğerliği

Kolon eşdeğerliği, artık laboratuvarların ve üreticilerin kolonları valide edilmiş kromatografik yöntemler için değerlendirmesine olanak tanımaktadır. Şekil 1 genel prosedürü göstermektedir.

Tam validasyona gerek kalmadan, kolon eşdeğerliği testini gerçekleştirmek için iki seçenek bulunmaktadır:

  1. kullanıcı, tamamen valide edilmiş metot için belirtilenle aynı L-grubuna ait olan kolonu seçer.
  2. kullanıcı, sübstitüentin kimliğinde değişiklik olmayan, sabit fazın fizikokimyasal özelliklerine benzer L-grubuna ait olan bir kolonu seçer.

USP Genel Bölüm <621> [18], kolonun nitelendirilmesi gereken valide edilmiş metodun uygunluk ve kabul kriterlerinin yanı sıra bu prosedür için gereklilikleri de belirtmektedir.

Şekil 1. Şematik gösterim USP tarafından eşdeğer ayırma kolonlarının nasıl önerildiğini, incelendiğini, onaylandığını ve kabul edildiğini göstermektedir.

Metrohm'un başarılı kolon eşdeğerliği çalışmaları

Metrohm, tam USP metot validasyonlarının gerçekleştirilmesiyle ilgilenmektedir. Örnek bir çalışma, AN-S-398 Uygulama Notunda açıklanmaktadır: "Sodyum ve potasyum fosfat katkılı enjeksiyonlarda fosfat analizi". Bu uygulamada, fosfat tayini için Metrosep A Supp 17 - 150/4.0 kolonu kullanılmaktadır. 

Birçok Metrohm kolonu (Tablo 1), kolon eşdeğerliği süreci kapsamında USP metotlarına uygun hale getirilmiştir. Diğer örnekler arasında, sodyum nitritte (AN-S-400) nitrit analizi için Metrosep A Supp 4 - 250/4.0 kolonunun veya aşağıda daha ayrıntılı olarak gösterildiği üzere vorikonazol miktarının belirlenmesi için Metrosep A Supp 1 kolonunun validasyonu yer almaktadır.

Örnek uygulama: vorikonazol analizi

Metrosep A Supp 1 kolonu, Vorikonazolle İlgili Bileşik F'nin analizi için USP tarafından onaylanmıştır. Vorikonazol, ciddi mantar enfeksiyonlarını tedavi etmek için kullanılan bir ilaçtır [25]. Tablo 2'de tüm USP gereklilikleri ve metot parametrelerinin yanı sıra, kolon eşdeğerliği çalışması için elde edilen performans özellikleri listelenmektedir. 

Çalışma, Vorikonazolle İlgili Bileşik F RS çözeltileri kullanılarak 940 Professional IC Vario sistemi ile gerçekleştirilmiştir. Sistem uygunluk testi için farklı konsantrasyonlar (2,5–5 µg/mL) ve bileşimler kullanılmıştır (Tablo 3). Ek olarak, bir örnek vorikonazol çözeltisi test edilmiştir (Seri No: VZFP22009, Tablo 4). 

Tablo 2. USP'ye göre Vorikonazolle İlgili Bileşik F için kolon eşdeğerliğine ilişkin gereklilikler.

USP uyumlu Vorikonazolle İlgili Bileşik F - Özet Tablosu
Parametreler USP Monograf Metrohm
Eluent (Mobil faz)

Sodyum hidroksit çözeltisi: Suda 470 g/L sodyum hidroksit

Mobil faz: Metanol, su ve sodyum hidroksit çözeltisi (500:1500:0.175)

 USP Monografı ile aynı
Klorür stok çözeltisi Suda 86 μg/mL sodyum klorür USP Monografı ile aynı
Standart stok çözeltisi 250 μg/mL USP Vorikonazolle İlgili Bileşik F RS. Son hacmin yarısına kadar metanolle çözün ve mobil fazla son hacme kadar seyreltin. USP Monografı ile aynı
Standart çözeltisi Metanol ve mobil faz karışımı (50:50) içerisinde Standart stok çözeltiden hazırlanan 5,0 μg/mL USP Vorikonazolle İlgili Bileşik F RS USP Monografı ile aynı
Sistem uygunluk çözeltisi A Metanol ve mobil faz karışımı (50:50) içerisinde Standart stok çözeltisinden hazırlanan 5 μg/mL USP Vorikonazolle İlgili Bileşik F RS ve 1,7 μg/mL sodyum klorür
 USP Monografı ile aynı
Sistem uygunluk çözeltisi B Mobil faz içerisinde Standart çözeltisinden hazırlanan 2,5 μg/mL USP Vorikonazolle İlgili Bileşik F RS
 USP Monografı ile aynı
Örnek Çözeltisi 5 mg/mL Vorikonazol. Son hacmin yarısına kadar metanolle çözün ve mobil fazla son hacme kadar seyreltin. USP Monografı ile aynı
Tespit türü Baskılamalı iletkenlik USP Monografı ile aynı:
Baskılamalı iletkenlik (MSM_ChS)
Kolon 4 mm × 5 cm ön kolon ve 4 mm × 25 cm analitik kolon; her ikisi de L46 dolgulu Metrosep A Supp 1 Guard/4.6 (P/N: 6.1005.340)
Metrosep A Supp 1 - 250/4.6 (P/N: 6.1005.300)
Akış Hızı 1.0 mL/dk USP Monografı ile aynı
Enjeksiyon Hacmi 20 µL USP Monografı ile aynı
Analiz Süresi bahsedilmemiş 60 dakika
Kolon Fırın Sıcaklığı 40 °C USP Monografı ile aynı

Metrosep A Supp 1 - 250/4.6 kolonunu kullanan Metrohm IC sistemi, Vorikonazolle İlgili Bileşik F RS'nin analizi için USP uygunluk kriterlerini karşılamıştır (Tablo 3).

Tablo 3. Vorikonazolle İlgili Bileşik F'nin (VRC-F) analizi için USP Monograf gereksinimleriyle karşılaştırıldığında Metrohm IC sisteminin uygunluğunun belirlenmesi.

Sistem uygunluğu (n=6) USP Monograf Metrohm
Kuyruklanma faktörü
(Sistem Uygunluğu Çözelti B)		 VRC-F piki için NMT 2.0  1.219 (GEÇTİ)
Bağıl Standart Sapma
(Sistem Uygunluğu Çözelti B)		 VRC-F piki için NMT 10.0% 2.347% (GEÇTİ)
VRC-F iyonu ve Klorür iyonu arasındaki çözünürlük
(Sistem uygunluğu Çözelti A)		 NLT 3.5 11.41 (GEÇTİ)

Bu çalışma, aynı zamanda vorikonazol örnek analizlerine ilişkin kabul kriterlerini de karşılamış (Tablo 4) ve USP tarafından kabul edilmiştir. Vorikonazolle İlgili Bileşik F'nin örnek bir kromatogramı Şekil 2'de gösterilmektedir.

Tablo 4. İyon kromatografi ile vorikonazol analizi için USP kabul kriterleri.

Vorikonazol (Seri Numarası: VZFP22009) USP Monograf Metrohm
Ortalama Numune sonuçları:
Üçlü Numune preparatları (Vorikonazol örnek çözeltisi)		 NMT 0.1% 0.04% (GEÇTİ)
Şekil 2. Metrosep A Supp 1 kolonu ile belirlenen Vorikonazolle İlgili Bileşik F için USP referans standardının örnek kromatogramı.

Farmasötik analizlerde kolon eşdeğerliğinin önemi

Özel laboratuvarlarda kullanılan iyon kromatografi sistemleri, USP onaylı kurulumlardan farklı olabilir. Bu çoğunlukla kullanılan kromatografik kolonlardan kaynaklanmaktadır. USP Monograf modernizasyon girişimi, kolon seçimini araştırmacılara kadar genişletmiştir. Bu durum, ilaç endüstrisi için oldukça faydalı olmuştur.

Kolon eşdeğerliği çalışmaları, yüksek kaliteli farmasötik analiz için alternatif analitik kolonların kullanılmasına olanak tanımaktadır. Bu, birkaç hafta süren tam metot validasyon prosedürünü ortadan kaldırarak önemli miktarda zaman ve emek tasarrufu sağlamaktadır. Nihai olarak analitik sonuçların doğruluğu ve güvenilirliği, valide edilmiş yönteme göre elde edilmektedir. 

Metrohm, başarılı kolon eşdeğerliği çalışmaları ile onaylanan valide edilmiş USP yöntemleri için USP tarafından doğrulanmış çeşitli uygulamaların yanı sıra alternatif kolonlar da sunmaktadır.

[1] The United States Pharmacopeial Convention. Monograph Modernization History. https://www.usp.org/get-involved/partner/monograph-modernization-history (accessed 2023-09-13).

[2] Kappes, S. When HPLC Fails: IC in Food, Water, and Pharmaceutical Analysis. White paper, WP-045EN, Metrohm AG, Herisau, Switzerland 2019.

[3] Kappes, S.; Steinbach, A.; Ruth, K. IC: The All-Rounder in Pharmaceutical Analysis. White paper, WP-019EN, Metrohm AG, Herisau, Switzerland 2017.

[4] Metrohm AG. Pharmaceutical Analysis: Quality Control of Pharmaceuticals. Brochure, 8.000.5139EN, Metrohm AG, Herisau, Switzerland 2015.

[5] Subramanian, N. H.; Wille, A. Inline Sample Preparation – An Effective Tool for Ion Analysis in Pharmaceutical Products. Metrohm AG, 8.000.6010.

[6] Metrohm AG. Bring Your USP Methods up to Date! - The Benefits of Metrohm Ion Chromatography for Your Analytics of APIs, Impurities, and Excipients. Brochure, 8.000.5436EN, Metrohm AG, Herisau, Switzerland 2023.

[7] Jenke, D. Application of Ion Chromatography in Pharmaceutical and Drug Analysis. Journal of Chromatographic Science 2001, 49 (7), 524–539. DOI:10.1093/chrsci/49.7.524

[8] Metrohm AG. Quality Control of Dialysis Concentrates; Application Note, AN-D-003; Metrohm AG: Herisau, Switzerland, 2022.

[9] Metrohm AG. Qualitative Determination of Anions in Urine to Verify Adulteration; Application Note, AN-S-215; Metrohm AG: Herisau, Switzerland, 2005.

[10] Metrohm AG. Mannitol, Rhamnose, Lactulose and Lactose in Blood Serum with Pulsed Amperometric Detection (PAD); Application Note, AN-P-063; Metrohm AG: Herisau, Switzerland, 2016.

[11] Metrohm AG. Standard Methods in Water Analysis; Application Bulletin, AB-221; Metrohm AG: Herisau, Switzerland, 2015.

[12] Bruttel, A.; Seifert, N.; Läubli, M.; et al. Monograph: Analysis of Water Samples and Water Constituents with Metrohm Instruments, 8.108.5071EN; Metrohm AG: Herisau, Switzerland, 2021.

[13] Ruth, K. Measuring Organic Acids and Inorganic Anions with Ion Chromatography Mass Spectrometry. White paper WP-086EN; Metrohm AG, Herisau, Switzerland 2023.

[14] Metrohm AG. Trace Monitoring in Distilled Water Using Ion Chromatography; Application Note, AN-Q-008; Metrohm AG: Herisau, Switzerland, 2015.

[15] Ruth, K.; Pfundstein, P.; Martin, C.; et al. IC–ICP–MS for Monitoring the Fate of Iodinated X-Ray Contrast Media after Ozonation (TA-052). LCGC International - The Column 2015, 11 (16).

[16] Pfundstein, P.; Martin, C.; Schulz, W.; et al. IC–ICP-MS Analysis of Gadolinium-Based MRI Contrast Agents (TA-023). LCGC International - The Application Notebook 2011.

[17] Metrohm AG. Wastewater Analysis in Treatment Plants. Brochure, 8.000.5142EN, Metrohm AG, Herisau, Switzerland 2015.

[18] U. S. Pharmacopeia/National Formulary. General Chapter, <621> Chromatography; USP-NF: Rockville, MD, USA, 2023. DOI:10.31003/USPNF_M99380_07_01

[19] U. S. Pharmacopeia/National Formulary. General Chapter, <1065> Ion Chromatography; USP-NF: Rockville, MD, USA, 2023. DOI:10.31003/USPNF_M897_01_01

[20] U. S. Pharmacopeia/National Formulary. General Chapter, <1225> Validation of Compendial Procedures; USP-NF: Rockville, MD, USA, 2023. DOI:10.31003/USPNF_M99945_04_01

[21] Schäfer, H.; Läubli, M. Monograph Ion Chromatography, 8.108.5077EN; Metrohm AG: Herisau, Switzerland, 2023.

[22] U. S. Pharmacopeia. Chromatographic Columns; USP: Rockville, MD, USA, 2023.

[23] U. S. Pharmacopeia/National Formulary. Reagents; USP-NF: Rockville, MD, USA, 2023.

[24] U. S. Pharmacopeia/National Formulary. <591> Zinc Determination. In General Chapter; USP/NF, Rockville, MD, USA; DOI:10.31003/USPNF_M99350_05_01

[25] ASHP. AHFS® Patient Medication Information™: Voriconazole, 2023.

Bilgi birikiminiz

İlaç monografları, analizleri ve safsızlık değerlendirmeleri – USP yöntemlerinizi Metrohm İyon Kromatografi ile güncelleyin

Broşür: USP yöntemlerinizi güncelleyin!

İsteğe özel webinar: İyon Kromatografi ile farmasötik maddelerde safsızlıkların analizi

Yazar
Süss

Dr. Elke Süss

İyon Kromatografi Uygulama Uzmanı
Metrohm International Headquarters, Herisau, İsviçre

İletişim

Klein

Dr. Michael Klein

Ruhsatlandırma İşleri Müdürü
Metrohm International Headquarters, Herisau, İsviçre

İletişim