AN-P-086
2021-03
パルスアンペロメトリー検出ICによるインスタントコーヒー中炭水化物測定
Free and total carbohydrate determination with IC-PAD according to AOAC 996.04 and ISO 11292
概要
コーヒーは、経済的に非常に重要な、きわめて人気の高い飲料です。そのため、コーヒー中の混入物の追跡を含む品質保証は確立されたプロセスであり、消費者にとっての要件でもあります。
コーヒー生豆の最大50%を占める炭水化物は、風味、粘性、香りを与える成分として機能します[1]。また、混入物のないインスタントコーヒーは純粋な焙煎コーヒーのみから作られるため、炭水化物は真正性のトレーサーとしても役立ちます[2,3]。ISO 24114およびAFCASOLEによる品質評価のために、明確な規格基準が定められています(例:全炭水化物に対する質量分率として表した、全グルコース2.46%未満、全キシロース0.45%未満という上限)[3]。AOAC 996.04およびISO 11292は、遊離炭水化物と全炭水化物の分析に関して、インスタントコーヒーの品質試験における分析要件を示しています。イオンクロマトグラフィー(IC)により、AOACおよびISOに従って必須の分析対象物であるアラビノース、フルクトース、ガラクトース、グルコース、マンノース、スクロース、マンニトール、キシロースを正確に定量できます。ここで紹介するIC法はきわめて高感度であり、ラムノースなどに見られるような、分析対象物の共溶出が起こり得るというごく一般的な課題を克服します。
サンプルとサンプル前処理
2種類のインスタントコーヒーブランド(Jacobs coffee GOLDとお客様のサンプル)のインスタントコーヒー粉末(100 mLあたり約300 mg)を、AOACおよびISOに記載されている方法に従って調製し、遊離炭水化物(アラビノース、フルクトース、ガラクトース、グルコース、マンノース、スクロース、マンニトール)と全炭水化物(アラビノース、ガラクトース、グルコース、マンノース、キシロース、マンニトール)の量を酸加水分解後に求めました。
遊離炭水化物の測定では、コーヒー粉末を超純水(UPW)100 mLに溶解し、その後ろ過(0.25 μm)しました。全炭水化物の分析では、コーヒー粉末をHCl(0.1 mol/L)中、100 °Cで加水分解(150分)し、UPWで100 mLに希釈した後、Ag+-H+カートリッジの組み合わせでろ過しました。最終的にUPWで10~50倍に希釈することを推奨します。
実験
上記で指定した溶解(遊離)炭水化物および全炭水化物の分析対象の炭水化物は、二元高圧グラジエントと流量グラジエントを組み合わせて(940 Professional IC Vario ONE/HPG構成)、Metrosep Carb 2カラムでベースライン分離されました(図1)。本法の検出感度を向上させるため、300 mmol/L NaOHを用いたPCRの後にアンペロメトリー検出を行いました。
結果
分析した2種類のインスタントコーヒー試料について、UPWに溶解した後の遊離炭水化物含有量(結果は示していません)は、0.2~27 g/kgの範囲でした。質量分率は両試料で固有のパターンを示しました。Jacobsブランドではアラビノースとマンノースが優勢(約35質量%)である一方、お客様提供のインスタントコーヒーブランドで最大のピークに相当したのは、グルコース(約20質量%)とフルクトース(40質量%近く)でした。
酸加水分解後の全炭水化物含有量は、品質管理と純度評価において特に重要です(表1)。ISO 24114は、全グルコースと全キシロースについて、それぞれ2.32%と0.42%の上限を定めています。試験した両試料の全炭水化物含有量は、明確に異なる分布を示しています(表1および図2)。両ブランドは、ガラクトースとアラビノースを同程度の割合で含んでいます。グルコース、マンノース、キシロースの含有量は、より広い範囲で異なります。
品質基準をより詳しく見ると、Jacobs coffee GOLDの純度は、混入物のない製品として承認できます。お客様提供のブランドは混入を示しており、該当する検査には不合格となります。
| Jacobs (g/kg) [M%] | お客様 (g/kg) [M%] | |
|---|---|---|
| マンニトール | ND | 9 [2.6%] |
| アラビノース | 28.3 [6.5%] | 36 [10.2%] |
| ガラクトース | 190.0 [43.9%] | 197.8 [56.2%] |
| グルコース | 6.3 [1.5%] | 34.2 [9.7%] |
| マンノース | 207.1 [47.8%] | 68.5 [19.4%] |
| キシロース | 1.2 [0.3%] | 6.7 [1.9%] |
| 全炭水化物含有量 | 436.9 [100%] | 352.2 [100%] |
まとめ
ここで紹介した方法により、インスタントコーヒー中の溶解炭水化物および全炭水化物の測定に関するAOAC 996.04およびISO 11292の要件が満たされます。Metrosep Carb 2カラムで、二元高圧グラジエントと流量グラジエントを組み合わせることにより、必要な炭水化物の優れた分離を達成できます。本法のさらなる利点として、ISO法に共通する制約であるラムノースとアラビノースのピークの重なりが解消されます。全体として、必要なすべての炭水化物に加え、フコースとリボースについても正確な定量を行うことができます。
自動化とインライン試料前処理は、試料処理能力を高め、ラボの時間とコストを節約するためのさらなる改善策です。
アンペロメトリー検出を用いたICは、炭水化物分析を行う分析ラボにとって、堅牢で、特異性が高く、精密な価値ある追加手段です。