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El verde de malaquita (MG) es un tinte que se usa ampliamente como colorante textil y colorante biológico. También fue un fungicida notablemente efectivo utilizado en operaciones acuícolas hasta el cambio de siglo 21.S t siglo. El MG es sumamente tóxico para los peces y los mamíferos, y tanto él como sus metabolitos persisten en la carne, lo que lo convierte en una amenaza para la cadena alimentaria humana. La UE ha llegado a la conclusión de que los alimentos contaminados que contienen niveles superiores a 2 μg/g de MG constituyen un riesgo sanitario verosímil, y varios países han prohibido el verde de malaquita como aditivo para la acuicultura. A pesar de la estricta regulación, los productos del mar contaminados con MG continúan llegando a los consumidores a través de operaciones ilegales que evaden los estrictos procedimientos de supervisión y las normas de seguridad sanitaria.

Utilizar Misa (Metrohm Instant SERS Analyzer) para garantizar la seguridad alimentaria, la detección rápida y altamente sensible del verde de malaquita se logra en un formato de ensayo fácil.

Muchas matrices alimentarias requieren procedimientos complicados de digestión y extracción de muestras. Esta nota de aplicación describe una prueba de agua muy simple que se puede realizar directamente en el sitio de acuicultura, para determinar si el verde de malaquita se está utilizando ilegalmente como tratamiento fungicida.

Para establecer un espectro de referencia para MG, primero se analiza un estándar puro en agua utilizando nanopartículas de oro (Au NP). Este espectro SERS único (Figura 1) se puede utilizar para crear una entrada de biblioteca para MG.

Figure 1. Espectro de referencia estándar de 1 μg/mL Au NP SERS de verde de malaquita.
Misa utilizado para medir el contenido de MG en medios acuícolas.

Las pruebas simuladas de MG en medios de acuicultura se realizaron agregando muestras de agua corriente con un rango de concentraciones de analitos (10 y 1 μg/mL, 100, 10 y 1 ng/mL). Las muestras de prueba se prepararon pipeteando 0,1 mL de cada concentración de analito (a pH 7,0) en viales que contenían 0,8 mL de Au NP y 0,1 mL de 500 mmol/L de NaCl. Después de mezclar a fondo, las muestras se insertaron en el accesorio del vial Misa para la adquisición de espectros SERS.

Tabla 1. Parámetros experimentales
Aparato Adquisición
firmware 0.9.33 Potencia del láser 5
Software MisaCal V1.0.15 En t. Tiempo 1 s
misa vial Adjunto archivo 6.07505.040 Promedios 10
Kit de identificación - Au NP 6.07506.440 Trama EN

espectros superpuestos en Figura 2 en cada concentración de MG muestra una detección clara hasta 1 ng/mL.

Figure 2. Perfil de concentración de Au NP SERS de MG extraído del agua corriente. Los espectros se ponen en línea de base, con el fondo sustraído.

Detección de verde malaquita en el campo

Llene un vial limpio hasta la mitad con Au NP. Usando pipetas, agregue 2 gotas de medio de acuicultura y solución de NaCl a los Au NP, luego tape y agite suavemente el vial para mezclar. Inserte en el accesorio del vial en Misa para medir.

Tabla 2. Requisitos para el protocolo de prueba de campo
Kit de identificación - Au NP 6.07506.440
incluye: Nanopartículas de oro (Au NP)
Cucharón
Pipetas desechables
viales de vidrio de 2 ml
Reactivos  
solución de NaCl 3 g de NaCl en 100 ml de agua
Configuración de prueba Utilizar Kit de identificación OP en MISA

La detección altamente sensible de MG en una matriz de prueba potencialmente difícil se reduce a un ensayo muy simple con Misa y Au NP. Este análisis requiere una capacitación mínima del usuario y se puede realizar en el sitio para aplicaciones de prueba rápidas y de alto rendimiento. El límite inferior de MG informado aquí es preciso incluso por debajo del umbral para los niveles permisibles en alimentos contaminados, y se compara favorablemente con el límite de detección informado recientemente para MG en medios de acuicultura comercial.

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